为什么我们有时候跑出来的wb条带总是千奇百怪、不尽人意……本期内容中，我们将介绍6种常见的WB实验问题以及相应的解决方案。下面就跟着小编一起来看看吧！

1、蛋白条带呈梯形，波浪形，微笑形

✅可能原因：

电泳液过于陈旧，或者配制有问题；

电泳液成分比例不正确（若是自己配置）；

蛋白胶未及时保湿or胶放太久上层胶变干。

2、某个条带变形

✅可能原因:

胶体未完全聚合;

胶内含有颗粒或气泡;

配胶容器or玻璃板等材料未清洗干净。

3、条带呈哑铃状

✅可能原因:

胶没有配置好，胶凝固不均匀;

蛋白样品中杂质太多，裂解后未离心，将蛋白挤在两边。

➡️(只要条带清晰，趋势明显，背景不高，这种 情况并不影响条带的使用，可以作为数据)

‼️以上均为蛋白胶的配置问题，解决办法:

• 胶最好现配现用;
• 玻璃板和插胶的梳子使用前清洗干净，且⻛干后再使用;
• 配胶液从4度冰箱拿出来后放置10分钟，使其恢复室温再进行配置（预制胶不用考虑这条)
• 配胶液充分混匀后再倒入玻璃板。

4、蛋白条带“飘走了”

✅可能原因:

转膜时，三明治结构的转膜夹不够紧;

转膜过程中放热太多导致蛋白弥散;

电源不好用or电压电流不稳定。

5、条带模糊， “毛玻璃样”，边界不清晰， 或者不成条带形状

✅可能原因:

转膜时，三明治结构有问题;

电泳用的蛋白胶配置错误;

转膜过程中放热太多;

转膜滤纸过于陈旧，或不平整，坑坑洼洼，

纸屑太多。

❗️属同一类问题，解决办法:

• 忌过于松垮，陈旧的转膜夹，务必夹紧再放入槽中，微紧即可;
• 湿转法使用冰水混合物，湿转液提前预冷1小时左右，可放负20;
• 转膜用日常使用时电压较稳的电源。

6、蛋白条带相连，“手拉手”

✅可能原因:

上样量过大，这里主要指蛋白质量过高，上样体积过大也可能因为泳道的挤压出现此问题;

一抗孵育时间过⻓;

一抗浓度过大;

曝光时间过⻓(图上例子不是这个原因);

蛋白样品盐离子浓度过高

❗️解决办法:

• 蛋白浓度尽可能高，减少上样量;
• 一抗孵育4度过夜12小时，不好孵育的一抗可敷24小时;
• 上样量很多时，采用1.5mm的玻璃板或者大孔胶。