接上两期内容，本期大家跟着小编一起看看最后6种常见的条带问题以及解决办法吧！

13、膜上存在黑色细小颗粒，和细小黑斑

✅可能原因:

封闭液为溶解充分; 

脱脂奶粉变质析出，形成固体“奶盖”，还在使用; 

一抗和封闭物进行了结合反应。 

(脱脂奶粉封闭容易出现的现象)

❗️解决办法:

 此为脱脂牛奶封闭常⻅问题，建议重新配牛奶，溶解牛奶时间延⻓，以免有颗粒物。

14、杂带过多，未⻅明显特异性条带，且有 纵向

✅可能原因:

一抗特异性太差;

一抗不新鲜，使用次数过多;

封闭不够彻底;

样品不纯，存在不溶性颗粒。

❗️解决办法:

更换一抗，蛋白样品裂解后离心。 

转速和时间为:12000rpm*30min。

15、背景高，见明显特异性条带，但不干净

✅可能原因:

一抗不新鲜，使用次数过多(可能性最大); 

封闭不够彻底;

封闭液不好用。

❗️解决办法:

 配新的一抗，换封闭液，或者新配封闭液。

16、条带中间泳道部分变浅，或呈现空心状

✅可能原因:

对应泳道蛋白浓度过高，导致发光底物消耗;

膜上的发光液不均匀;

转膜三明治结构有问题。

❗️解放办法：

• 检查是否是因为个别样品浓度过高所致，如果是，稀释样品，调 ⻬蛋白浓度即可;
• 重新滴发光液，可把膜充分浸泡在发光液中大概5-10s，必要时可用1ml移液枪辅助；
• 把发光液均匀的淋到膜上，使其均匀分布;
• 转膜时避免“汉堡样”，三明治结构微紧即可，切勿过紧，使其鼓包

17、条带形状不一，大小不同

❗️解决办法:

• 尽可能保持上样量一致，相差1-2μl没问题，若因为内参等问题必须上样不同，上样少的泳道可用loading buffer补⻬到一致的体积;
• 制作蛋白样品时，同一组样品使用同一来源的loading buffer，浓度也最好一致，不同浓度的loading buffer甘油含量不一致，泳道间可 能会相互挤压，从而导致条带宽窄不一。

18、若以上问题都没有，那么请注意接下来的这个要点❗️

发光时，在趋势明显，条带清晰的前提下，曝光越短越好（上图），不建议长曝光作为数据（下图）。