核酸电泳是分子生物学中利用电场分离核酸片段的技术,以琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶为介质,通过分子筛效应实现DNA、RNA的分离与鉴定 。
其原理基于核酸在中性至碱性缓冲液中带负电向阳极迁移,迁移速率与分子量成反比,线性双链DNA的迁移距离与分子量对数呈可预测关系 。
琼脂糖凝胶适用于200bp至50kb的大片段分离,聚丙烯酰胺凝胶则能分辨单核苷酸差异的小片段(1kb以下) 。该技术始于20世纪60年代,初期采用密度梯度离心法,后借鉴蛋白质电泳引入凝胶基质。70年代琼脂糖成为主要介质,溴化乙锭染色法提升了检测灵敏度。伴随限制性内切酶和重组DNA技术的发展,凝胶电泳逐渐成为核酸分析的核心技术 。
在应用中,分析型电泳用于PCR产物验证、限制酶切分析及核酸定量,制备型电泳用于纯化PCR产物、测序文库构建等 。临床领域辅助肿瘤基因突变检测及HIV等病毒感染诊断
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