免疫印迹,又被称为蛋白质印迹(Western blot,WB),是一种复合性的免疫学检测技术。
该方法通过利用SDS-PAGE技术,在生物样本中将蛋白质分子根据其分子量在凝胶上进行分离,随后通过电转移的方式将这些蛋白质转移到固相膜上。固相膜上的蛋白质充当抗原,与相应的抗体发生免疫反应,接着与酶标记的第二抗体发生反应。最终,通过底物显色或荧光成像等手段,检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白质。
基本原理涉及通过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)对蛋白质样品进行分离,随后将其转移至固相载体,如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜。固相载体以非共价键方式吸附蛋白质,同时能够保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性的不变性。
在该过程中,固相载体上的蛋白质或多肽被作为抗原,与相应的抗体发生免疫反应,随后与酶或同位素标记的第二抗体发生反应。最终,通过底物显色或放射自显影等手段,实现对电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分的检测。
应用
(1) 从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;
(2) 定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况
(3) 用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析
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